Щороку 18 травня разом з усім світом музей академії долучається до проведення акції «Ніч в музеї». Традиційно, всі, хто приходить до музею в цю ніч, мають можливість потрапити на екскурсію з елементами театралізації. Саме з цим пов’язано гасло заходу – «однієї ночі історія оживе…».
В експозиціях та цікавих місцях університету гостей чекають живі історії від акторів, роль яких інколи виконують навіть викладачі Острозької академії. Щороку тематика екскурсій змінюється, але традиційним залишається дотримання атмосфери епохи, в якій відбувається все дійство. Загалом «Ніч в музеї» сповнена новинок, сюрпризів, теплих усмішок і щирих емоцій відвідувачів.